慢病毒包装

Column:Biochemical testing platform Time:2024-04-16
慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

 慢病毒(Lentivirus) 载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,能大大提高目的基因转导效率,而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加,这就为RNAicDNA克隆以及报告基因的研究提供了一个有利的途径。对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞,通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率,以达到目的基因的高效瞬时表达

慢病毒包装系统一般由慢病毒表达载体和慢病毒包装载体组成。慢病毒表达载体,即通常所说的穿梭载体,包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。

实验流程

1. 根据目的基因相关信息(序列,序列号等),构建含有外源基因或siRNA的重组载体;

2. 对于测序正确的重组质粒,提取和纯化高质量的不含内毒素的重组质粒;

3. 使用高效重组载体和病毒包装质粒共转染293T 细胞,进行病毒包装和生产,收集病毒液;

4. 浓缩、纯化病毒液;

5. 用高质量的病毒液感染细胞;

6. 通过定量PCR精确测定病毒滴度(高精确滴定方法)和Western 分析实验结果;

7. 用高质量的病毒液感染宿主细胞;检测基因功能或者siRNA的沉默效率以及使用药物进行稳定转染细胞株的筛选,通常状况下,筛选的细胞克隆株具有长期的表达稳定性。病毒液足够用于一般的动物活体实验。
  拓普生物提供慢病毒载体构建,RNAi(shRNA)miRNA、过表达和干扰慢病毒包装,以及基于慢病毒技术的稳定细胞系构建服务。

拓普生物慢病毒包装特点:

1.采用第三代4质粒慢病毒包装系统,生物安全性更高; 
2.采用VSV-G包膜,宿主范围更广; 
3. 产生的慢病毒滴度高,可达108~1010TU/mL; 
4.各种慢病毒穿梭载体可供选择:过表达、ShRNAmiRNATet诱导表达载体等; 
5.可带有荧光报告基因(GFP、RFP、mCherry、Luciferase等)和药筛标记基因(Puro、Neo、Hygromycin等),有多种启动子(CMV、PGK、CAG、Ubc等)可供选择; 
6.
4~5周内即可完成载体构建以及病毒包装服务。


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