细胞划痕实验
当细胞长成近100%密度单层状态时,在该单层细胞上人为划出空白区域--划痕,在所划出痕迹边缘的细胞会逐渐进入到划出的空白区域,使痕迹愈合。
我们为什么要做细胞划痕实验?
细胞划痕实验优点包括:
1.它一定程度上模拟了细胞在体内的迁移;
2.适合研究细胞与细胞,细胞与胞外基质之间因为相互作用而导致的细胞迁移;
3.重要的是该实验简单,价格便宜!
细胞划痕实验常用材料
6孔板、marker笔、直尺、100ul黄枪头、PBS、基础培养基等
细胞划痕步骤:
1.画线:用marker笔在6孔板背后,用直尺比着均匀画线,每隔0.5-1cm画一条线,横穿过整排孔。每孔穿过4-5条线。
2.铺细胞:在6孔板孔中加入约50万个细胞(每种细胞有所差异,保证过夜能长到100%)。
3.划痕:第二天,细胞长满后,用100ul黄枪头垂至背后的横线在孔中划痕。
4.清洗:用PBS清洗细胞3次,以洗掉划下的细胞,加入无血清的基础培养基(此时可以加入药物,以研究该药物对细胞迁移的影响)。
5.拍照:放入细胞培养箱中培养。根据实验需要在不同时间点拍照。
6.分析:可用Image J软件对伤口闭合度进行评估
0h 24h
细胞划痕实验注意事项:
1.细胞划痕实验选择细胞时尤其适用于具有迁移能力的上皮细胞,避免选择生长缓慢、贴壁不牢、长不满或堆积生长的细胞,如巨噬细胞等。
2.在划痕前细胞要铺满,但不能长得又太密,否则可能在划痕时成片滑落。
3.一般使用无血清的基础培养基培养,如果培养时间久或者无血清对细胞影响严重,可以用1%血清,但血清浓度最大一般不超过2%。
4.拍照时,每个时间点拍照的位置要一致,要拍同一个地方,否则结果无法分析。
更多信息,请咨询拓普生物!
| contact us Address: Room 402, West Block, Ganghongji Business Building, Nanshan District, Shenzhen 1107, Building 1, Hengtaiyu Building, Tongtong Road, Fenghuang Street, Guangming District, Shenzhen 11th Floor, Second Training Building, Guangdong Light Industry Vocational and Technical College, No. 152 Xingang West Road, Haizhu District, Guangzhou City Tel:0755-86325431 facsimile:0755-86325431 Service email:sales@topbiotech.com.cn |