小 RNA是 19~28 nt 的调控RNA分子,主要包括微 RNA(micro RNA,miRNA)和小干涉RNA(short interfering RNA,siRNA)两类。 miRNAs是长片段RNA序列的一部分,同siRNAs一样是比较短小的单链小分子RNA,一般来源于染色体的非编码区域,由大约70 nt大小的可形成发夹结构的前体加工而来,它通过与其目标mRNA分子的3 端非编码区域(3-untranslated region,3 UTR)互补导致该mRNA分子的翻译受到抑制。
microRNA参与基因转录后调控活动,其中多数miRNA具有高度序列保守性、表达时序性和组织特异性。最近的研究表明miRNA参与各种各样的调节途径,包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等,具有重要的基因表达调控作用。
检测方法
由于小分子RNA是一类很小的分子,部分小分子RNA表达水平可能很低,因而需要极为灵敏而定量的分析工具。常用的检测方法有:
1. Northern blotting
2. 核糖核酸酶保护分析以及基于此方法的液相杂交。
3. RT-PCR也被用来检测miRNA前体的表达水平, 其他基于PCR技术检测miRNA的方法有:引物延伸法,就是在引物的5 末端加一个特异标记,可以定量测定低丰度的RNA含量;原位杂交技术(CISH,FISH)可以方便的检测miRNA的时空表达的差异。
4. 芯片(microarrays)技术是一种较快的研究miRNA表达的方法。