弄个明白!病理组织学这些经典知识,一起来看看

Time:2024-04-19
病理组织学经典知识,一起来看看

 国际著名病理学家Karl Lennert曾经说过:技术是病理学之母。病理组织学属于形态学检验,组织病理学是将病变组织制成厚约数微米的切片,经不同方法染色后用显微镜观察其细微病变,对疾病做出病理学诊断。组织病理分析是检验大多数动物模型实验成功与否的金标准。病理学基本检验技术包括组织固定、石蜡制片、苏木素-伊红染色及常用特殊染色技术。

 

操千曲而后晓声,观千剑而后识器”,阅读下文自测病理组织学知识你知多少~

 

拓普生物

 

一、石蜡切片与冰冻切片

(一)石蜡切片制备流程

1

取材、固定

2

洗涤、脱水、透明、浸蜡、包埋

3

切片、捞片、晾片

4

染色、封片

 

(二)冰冻切片制备流程

1        

取材、固定

2        

OCT包埋

3        

液氮速冻

4        

切片、染色


TIPS:石蜡切片和冰冻切片如何选择?

1、冰冻切片优点制片时间短,时间快;缺点保存时间短;

2、石蜡切片对组织的形态保存比冰冻切片好,标本可以长期保存;

3、常规染色,组化优先推荐做石蜡切片;

4、免疫荧光推荐用冰冻切片 (石蜡有自发荧光);

5、脂质染色、ROS染色、 ATP染色,胆固醇染色推荐做冰冻切片。


二、HE染色

苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,简称HE染色法 ,石蜡切片技术里常用的染色法之一 。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。

图注:拓普生物HE染色图


1

组织固定

2

包埋

3

脱蜡

4

苏木素染色

5

伊红染色

6

脱水

7

封片

8

观察拍片

9

结果整理

图注:HE染色实验流程图

 

HE染色过程可能出现问题:

1、HE染色最常见的红蓝失调

偏蓝色:苏木素染色过深,分化不够;伊红试剂过期;伊红染色时间太短,分化过度。

偏红色:苏木素染色过浅,分化过度;组织固定不佳,细胞核不着色;脱蜡不彻底,苏木素染不上;苏木素氧化成熟不够;伊红染色过深,分化不足。

2、HE染色后出现的大白色斑块或斑点

答:脱蜡前烤片温度偏低,时间过短,蜡未完全融化;切片在脱蜡溶剂中停留时间过短;脱蜡溶剂使用太久,得更新。

 

3、细胞核染色过浅,颜色暗淡

答:切片在苏木素染液中停留过短,或苏木素过度氧化失效,或分化时间太长。对策:重新染色。将组织切片放入0.01%氢氧化钠、0.5%氨水、饱和的碳酸氢钠溶液、乙醇溶液,每个3-5min即可,接着重新染色。可以适当地组织的嗜碱性以增强核染色,如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氢钠溶液中3h,自来水冲洗5-10min染色,或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氢钠溶液中1h,自来水冲洗10min染色。

 

4、细胞核染色过深,胞浆着蓝色

答:切片在苏木素染液中停留过长;或切片太厚;或分化时间太短。这种情况首先镜下看看切片厚度(最佳厚度1-2层细胞核),要么重新染色,要么重新制片。

 

5、细胞核呈棕红色改变

答:苏木素染液过度氧化;或苏木素染色后反蓝不足导致。应该立即更换苏木素染色液。或在流动自来水(一般自来水PH7.5-7.8),或在稀释的氨水溶液,或在0.2%碳酸氢钠中适当浸泡,这些步骤均可一定程度地加强苏木素染色后的反蓝效果。

 

6、伊红染色较淡

答:伊红的PH改变了(PH可能已大于5);或反蓝液体未漂洗干净,残留后影响胞浆嗜酸性染色;或者切片太薄并且在随后的脱水步骤停留过久。对策:检查伊红染色液PH,可采用乙酸调至4.6-5.0。根据以上提示,调整实验步骤。

 

拓普生物

三、免疫组化

免疫组化是应用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术。


图注:拓普生物免疫组化图

 

1

组织固定

2

包埋

3

脱蜡

4

抗原修复

5

封闭

6

一抗孵育

7

二抗孵育

8

DAB显色

9

苏木素复染

10

观察拍照

11

封片

12

脱水透明

图注:免疫组化实验流程图

 

图注:拓普生物其他染色图

 


四、各类组织常见染色方法及指标

组织类型

实验方法

具体检测项目名称

常做特殊染色

常做组化荧光指标

 

TTC(脑梗),尼氏染色,甘安银染色,LFB染色,高尔基染色,刚果红染色,FJB染色

心脏

常做特殊染色

常做组化荧光指标

 

TTC(心梗),mason(心梗),天狼猩红(心梗),冰切油红(动脉粥样硬化,主动脉瓣)

主动脉

 

常做特殊染色

 

 

常做组化荧光指标

EVG,大体油红,冰切油红,movant五色法

 

a-SMA,VWF,VIII,VEGF

 

常做特殊染色

常做组化荧光指标

PAS染色,冰切油红,mason,天狼猩红

 

炎症:CD3,CD4,CD8,CD68,F4/80,MPO,Ly6G,CD11c,CD11b,IL2,IL4,IL6,IL8,IL10,TGFb,Tonfa;纤维化:Tonfa-SMA,FN,LN


 
 

 

常做特殊染色

常做组化荧光指标

 

PAS染色,PASM染色,mason,天狼猩红

 

纤维化:Tonfa-SMA,FN,LN

 

 

常做特殊染色

常做组化荧光指标

 

HE染色,PAS染色,mason,天狼猩红,Wiegert间苯二酚碱性品红染色

 

炎症:CD3,CD4,CD8,CD68,F4/80,MPO,Ly6G,CD11c,CD11b,IL2,IL4,IL6,IL8,IL10,TGFb,Tonfa;纤维化:Tonfa-SMA,FN,LN                

 

 

常做特殊染色

常做组化荧光指标

 

HE染色,PAS染色,阿利新蓝染色,AB-PAS染色,肥大细胞染色

 

c-kit,GLP-1,ZO-1,claudin,occluding

 

 

常做特殊染色常做组化荧光指标

HE染色,PAS染色,阿利新蓝染色,AB-PAS染色,肥大细胞染色

c-kit,GLP-1,ZO-1,claudin,occluding

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