新型细胞器——迁移体的发现

Time:2024-04-19
通过电子显微镜、场发射扫描电子显微镜、激光共聚焦、活细胞成像系统、光镜电镜联合技术等先进技术以及超高速密度梯度离心法联合使用,发现了一种新型细胞器,并且证实该细胞器与细胞迁移有关,并命名为迁移体。

2015年,清华大学余立教授团队首次在Cell research上提出迁移体migrasomes)概念,由此又多了一种新型细胞器。

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(一)细胞器的发现过程

细胞是生物体结构和功能的基本单位,真核细胞主要由细胞膜、细胞质基质和一些细胞器构成的,细胞的发现是随着光学显微镜,到电子显微镜加上密度梯度离心等技术的发展而逐渐发现的。余立教授团队通过电子显微镜、场发射扫描电子显微镜、激光共聚焦、活细胞成像系统、光镜电镜联合技术等先进技术以及超高速密度梯度离心法联合使用,发现了一种新型细胞器,并且证实该细胞器与细胞迁移有关,并命名为迁移体。

(二)迁移体的发现过程

作者通过原位包埋方法制备TEM切片,观察,发现有种结构经常倾向于出现在细胞的某一侧。这种结构由单层膜包裹,并且其中包含着一些更小的囊泡。由于这种结构的形状和石榴的形状极其相似,命名为石榴样结构(PLSs Figure 1A

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Figure 1

作者通过对石榴样结构的大量观察,发现不同的石榴样结构,其大小之间有一定的差别(0.5-2um左右),并且石榴体重包含的更小囊泡的数量也有很大差别。推测,石榴样结构直径的差别,以及更小囊泡数量的不同,与其所处的生长周期有一定的关系。(Figure 1CD)另外,作者观察到石榴体会通过丝状结构与细胞胞体之间连接在一起;通过场发射扫描电镜确定收缩丝上连着石榴样结构,并且石榴样结构是一个相对规则的球形(Figure 1BE)。

(三)迁移体的标记蛋白鉴定

  通过密度梯度联合超高速离心方式,对样品进一步纯化,使得石榴样结构相对于集中在蔗糖梯度的某一层,最终获得精提的石榴样结构(Figure 1F);将纯化的石榴样结构做蛋白质谱分析,发现60%的是膜相关蛋白(Figure 2B)。从质谱结果中挑选感兴趣的蛋白,将兴趣蛋白与GFP标记融合表达,转染细胞,通过激光共聚焦发现了一个标记蛋白Tspan4Figure 2C。通过光镜电镜联合技术,确认激光共聚焦观察到的带Tspan4标记的石榴样结构就是透射电子显微镜的石榴样结构(Figure 2E)。

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Figure 2

 

(四)迁移体形成机制

迁移体在收缩丝上从无到有,从小长大的一个过程,并不是细胞直接留下的一个囊泡状结构(Figure 3B3C)。迁移体的形成是一个相对快速的过程(Figure 3E),有一段时间,就会进入到一个相对稳定的阶段,大小不会再发生变化,最后,迁移体与收缩丝断裂,本身也破裂(Figure 3D)。

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Figure 3

 

细胞迁移过程中形成石榴样结构;在细胞培养中加入Fn(具有促进细胞的黏附和迁移),发现在促进细胞迁移后,石榴样结构也更多,证实石榴样结构与细胞迁移有关 Figure 4B4C);Sharpin敲低,细胞迁移速度加快,同时,石榴样结构数量增加(Figure 4D4E

加入细胞迁移的抑制剂后,石榴样结构数量减少(Figure 4F4G);多种实验证明石榴样结构与细胞迁移相关,故命名为迁移体。

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Figure 4

 
        
迁移体的结构相对较大,要克服巨大的膜表面张力,最终才能形成迁移体,需要形成以及维持这样一种结构,最有可能参与其中的蛋白应该就是肌动蛋白。采用LifeAct-GFP标记肌动蛋白,发现LifeAct确实存在于迁移体中,说明在迁移体中,存在聚合的肌动蛋白,并且LifeAct靠近迁移体的膜,暗示其对迁移体的形态维持有很重要的作用(Figure 5B)。加入肌动蛋白聚合的抑制剂影响迁移体的形成(Figure 5C5D)。

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Figure 5

 

(五)迁移体在体内外存在

  迁移体在正常细胞和癌细胞,在动物的各组织内均广泛存在(Figure 6)。

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Figure 6

 

(六)迁移体的功能研究

GFP指示细胞质成分,TSPAN4指示迁移体;发现细胞质成分可以进入到迁移体中(Figure 7A7B),将稳定表达TSPAN4-GFPNRK细胞与稳定表达LAMP1-mCherryNRK细胞共培养,发现迁移体会被周围的细胞摄取(Figure 7C)。

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Figure 7

(七)迁移体标记染料

另外,作者建立了一种大分子染料X来标记迁移体。

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迁移体发现总结

Ø  透射电镜发现石榴样结构,并且结构通过丝状物与胞体相连。

Ø  利用超高速密度梯度离心和质谱技术,发现感兴趣的蛋白,通过激光共聚焦和光镜电镜联用技术,找到石榴样结构的标记蛋白TSPAN4

Ø  通过标记TSPAN4,利用长时间激光共聚焦拍摄,发现石榴样结构从无到有,从小到大,400分钟左右破裂,释放内容物 

Ø  通过长时间激光共聚焦拍摄,发现石榴样结构与细胞迁移有关;通过促进细胞迁移(加入Fn或者敲低Sharpin)石榴样结构增加,而抑制细胞迁移(使用迁移抑制剂),发现石榴样结构减少,从而将石榴样结构命名为迁移体。

Ø  在不同细胞(正常细胞和肿瘤细胞)、三维培养、动物组织中广泛发现迁移体存在。

Ø  迁移体功能研究:利用共聚焦技术,发现细胞质成分会进入迁移体,迁移体可被周围细胞摄取。

Ø  发现一种染料可标记迁移体。

 

参考文献:

1.       Ma L , Li Y , Peng J , et al. Discovery of the migrasome, an organelle mediating release of cytoplasmic contents during cell migration[J]. Cell Research, 2015, 25(1):24-38.

2.       马亮迁移体的发现及其分子机制研究[D]. 2017.