了解神经病理性疼痛,从坐骨神经损伤(CCI)动物模型开始!

发布时间:2024-04-19
神经病理性疼痛是由神经系统损伤或异常的一种难以治疗的疼痛状态,坐骨神经慢性压迫损伤模型(CCI)是研究神经病理性疼痛最常见的动物模型,为进一步研究神经损伤修复的机制及策略提供基础。

神经病理性疼痛是由神经系统损伤或异常的一种难以治疗的疼痛状态,坐骨神经慢性压迫损伤模型(chronic constriction injury of the sciatic nerve,CCI)是研究神经病理性疼痛最常见的动物模型,为进一步研究神经损伤修复的机制及策略提供基础。

 

下面我们就来看看坐骨神经慢性压迫损伤模型的具体建立:

 

01:术前准备

实验动物:健康SD大鼠,6~8周龄,雄性,体重180~250g;
实验器材:4-0缝线、缝合针、弯镊2把、眼科剪1把、止血钳1把、5ml注射器、自制辅助固定钩2支、棉球、棉签、电动剃毛器等;
实验试剂:4%水合氯醛、碘伏、医用酒精、生理盐水;

02:实验方法

1)根据动物体重,将4%水合氯醛,按照0.5ml/100g的剂量进行腹腔注射,以将动物麻醉,后用剃毛器剃去左后肢大腿外侧至股骨区域的毛发;
2)将动物以俯卧位固定四肢于手术板上,用酒精棉球对手术区皮肤进行消毒处理,然后剪开左侧大腿皮肤约1.5cm
3)用止血钳顺肌纹钝性分离股二头肌暴露出坐骨神经。再用固定钩稍微撑开肌肉,暴露出手术视野,在坐骨神经三叉分支前的主干部位游离神经7mm左右,用镊子轻柔分离出坐骨神经;
4)在距离三叉分支前2mm处,用4—0缝合线结扎坐骨神经4道,每道间距1mm,使被结扎的神经长约4~5mm。结扎的松紧程度以打结时可见小腿肌肉或脚趾轻微抽动为准;
5)用生理盐水或PBS将手术区域冲洗干净,依次缝合肌肉、皮下组织及皮肤,清洗伤口并用碘伏消毒。

 

03:模型动物鉴定

1)行为学观察

在术后两周内,每隔1~2天观察大鼠的步态和左后肢的姿势、后肢是否有蜷缩、是否存在舔咬四肢等。
较成功的模型术后1~2周内,下肢行走无力,左侧足趾并拢轻度外翻,经常悬空不敢着地;站立时以右后肢持重,左后肢抬起并紧贴腹部;术后14天左右,左后肢出现比较明显的肌肉萎缩。

 

2)Western Blotting检测GCH1表达程度

分别于手术3、7、14、28天,取大鼠手术侧L4~L6背根神经节(DRG),Western Blotting检测与疼痛相关基因三磷酸环化水解酶1(GCH1)的表达变化。与正常大鼠相比,CCI大鼠GCH1的表达水平明显更高,且呈现先升高后降低的趋势。

该模型操作简单,易掌握,术后第2天开始便出现疼痛反应,10~14天达到高峰,持续2个月后疼痛反应消失。