人工脱水包埋
现实生活里有不少单位是不愿投资购买属于单位的自动脱水包埋机,一是该仪器的价格问题,二是单位不是经常有脱水包埋的需求,三是脱水包埋机的保养维护成本问题。那么人工脱水包埋在这种情况下就成了救星,它的主要优势是道具常见,操作简单,试剂耗材可长期使用,成本门槛低。
不管什么情况,本章内容将会介绍出一个纯属人工对组织样品进行石蜡脱水包埋的实验步骤经验分享。
实验流程
1、取样(本章内容适合普通组织,不包括骨头等组织)
2、多聚甲醛固定(12h以上)
3、石蜡包埋盒上写好标记,放入对应组织样品
4、流水冲洗15min(去掉组织表面的固定液)
5、脱水
不同组织具体脱水时间如下:(仅供参考)
80%酒精 | 95%酒精① | 95%酒精② | 100%酒精① | 100%酒精② | |
心 | 40min | 20min | 20min | 7min | 7min |
肝 | 20min | 10min | 8min | 5min | 5min |
脾 | 10min | 7min | 7min | ||
肺 | 30min | 20min | 20min | 10min | 10min |
肾 | |||||
血管 | 20min | 20min | 20min | 10min | 10min |
脂肪 | 30min | 20min | 10min | 5min | 3min |
注意:该步骤是关键步骤,脱水过度会造成后期石蜡切片失败,第一缸100%酒精过后要迅速甩干放进第二缸100%酒精进行继续脱水,脱水成功的表现是用手轻捏组织像似捏刚成熟的猕猴桃
6、ortho-xylene组织透明
ortho-xylene① | ortho-xylene② | |
心 | 5min | 5min |
肝 | ||
脾 | 7min | 7min |
肺 | ||
肾 | ||
血管 | 10min | 10min |
脂肪 | 5min | 5min |
注意:该步骤是关键步骤,透明过度会造成后期石蜡切片失败,第一缸ortho-xylene过后要迅速甩干放进第二缸ortho-xylene进行继续透明,该步骤不宜停顿,因为试剂会持续反应。
7、浸蜡烘箱调到60°提前3H融蜡,烘箱内放三杠2L大的铁缸作为组织浸蜡的步骤
蜡缸① | 蜡缸② | 蜡缸③ | |
心 | 40min | 1h | 1h |
肝 | |||
脾 | |||
肺 | |||
肾 | |||
血管 | 40min | 40min | |
脂肪 | 30min |
注意:该步骤中,尽量将组织的ortho-xylene甩干再放进第一缸蜡缸进行浸蜡环节,而且每缸放样浸蜡的前一分钟用长镊子搅拌包埋盒,使蜡充分融进包埋盒里面浸到组织
8、包埋机包埋
9、冷冻台凝固蜡块组织