节前再学习一波！细胞培养之支原体检测

• 支原体简介

1. 何为支原体：支原体是目前发现的最小的最简单的原核生物，直径50-300nm，基因数量为480，wei一可见的细胞器只有核糖体。于1898年Nocard等发现并命名，不仅能在无生命的人工培养基上生长繁殖，能通过细菌滤器。

2. 支原体分布：支原体存在于我们身体很多地方，如眼睛，鼻孔，肛门，口腔，阴道等都存在支原体。

• 支原体对细胞的影响

粘附于宿主细胞表面的支原体从细胞吸收营养，从细胞膜获得胆固醇等脂质，引起细胞损伤。在细胞培养中大多细胞表现为分泌物增多、细胞破碎、生长缓慢，严重者导致细胞死亡。
此外，支原体代谢产生的有毒物质，如溶神经支原体能产生神经毒素，引起细胞膜损伤；有的支原体含有尿素酶，可以水解尿素产生大量氨，对细胞有毒害作用。
当培养中的细胞生长缓慢，漂浮物增多时就有必要做支原体检测。对于珍贵的细胞可以做到早发现，早抢救！

三、支原体检测步骤
1、试剂与耗材：包括引物、DNA聚合酶、去离子水、移液器头、PCR管等。
2、模板：细胞培养48 h后的培养基经沸水浴10min，取上清即可
3、PCR扩增：将反应体系配好混匀，选择合适的程序进行扩增。
4、琼脂糖糖凝胶电泳（如下图）
阴性，无DNA条带出现；
阳性，引物1有大小约187 bp的DNA条带出现；引物2有大小约205bp的DNA条带出现。

灵赋拓普支原体检测优势：
（1）精准：采用经典的PCR法，能够检测极微量的样品，并且条带单一，清晰无杂带；
（2）检测范围广：我们采用2对引物分别来检测，可检测二百多种支原体，涵盖细胞培养遇见的所有常见种类；
（3）高效：收到样品2天内即可出具实验报告。