基因鼠的繁殖和鉴定那些事儿
作为科研民工底层的铲屎官，以为只要本铲屎官老老实实铲屎，勤勤恳恳换笼，本本分分造模，写文章、看文献这种费头发的高大上工作与本铲屎官无缘。
直到数周前……人艰不拆，累觉不爱，生无可恋
繁殖嘛？合笼完事。鉴定嘛？pcr干他。至于写出个千把字的公众号文章，臣妾做不到哇。
罢了罢了，先从何为基因鼠开始？
能稳定遗传且表达外源基因的小鼠即我们一般意义上所说的转基因小鼠。话说，第一只携带外源基因的小鼠是Rudolf Jaenisch于1974年通过将SV40 病毒的DNA注射到小鼠的囊胚创造出来的。后来又有研究人员把Murine leukemia病毒注射到小鼠胚胎得到了能通过生殖系统稳定遗传的小鼠，且该外源基因能在后代中稳定表达。自此，针对小鼠的基因编辑工程便一发不可收拾直至今日。如今，转基因小鼠的制备技术主要有大两类，DNA原核显微注射法和胚胎干细胞囊胚显微注射法。
DNA原核显微注射法
DNA原核显微注射法就是通过显微操作将外源基因直接注入受精卵，使得外源基因整合到DNA中，发育成转基因鼠的方法。通过该方法通常我们会获得很多个带有外源基因插入的首建鼠（Founder）。每一个首建鼠，外源基因插入的位置或次数都是不同的。所以每个首建鼠（F0）都应该自成一系，也就是我们说的建系。首先，F0要与野生型小鼠（比如：C57BL/6J）交配，获得基因型明确的 F1 子代 KO 杂合子（+/-）小鼠。随后，才能进行杂合子小鼠的相互交配。
胚胎干细胞囊胚显微注射法
原理与DNA原核显微注射法类似，不同是在体外将外源基因导入胚胎干细胞，然后将转基因的胚胎干细胞通过显微操作仪注入动物囊胚，此胚胎干细胞可参与宿主的胚胎构成，形成嵌合体，直至达到种系嵌合。由于嵌合体小鼠个体中含有不同来源的细胞，即该生物体中嵌合了两种不同遗传结构的细胞，其后代会出现不可预见的遗传性状的分离，故嵌合体小鼠不能直接用于科学研究，必须采用回交的方式得到稳定遗传的基因打靶种系后才能使用。
基因鼠的繁育
基于基因编辑技术的高端性，基因编辑鼠的价格较为昂贵。一般实验室一次只能购买几只甚至一只基因鼠。因此我们在得到基因鼠后要尽快安排繁育计划，以确保繁殖出足够多的基因鼠供实验及保种需求。
因为我们一般从商家拿到鼠都是具有稳定遗传性的杂合子基因编辑鼠F1，所以，我们的繁育也是从杂合子开始。首先，用杂合子与野生型交配，基于孟德尔遗传定律，可以获得50%的杂合子和50%的野生型鼠；再通过杂合子繁育可理论上获得1/4的纯合子。
而对于条件性敲出或敲入鼠，其繁育要相对复杂一些，因为他们首先要与Cre鼠进行交配，经过鼠尾鉴定后得到杂合之，再进行纯合子繁育。
最后，提炼下基因鼠鉴定的那些要点，记牢哈，不再重复第二遍了。。。
基因鼠的鉴定
剪尾取样编号
DNA提取
Pcr
琼脂糖凝胶电泳
成像分析并记录。
最后的最后，祝大家早日发paper.
